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凯氏定氮法结合前处理技术测定饲料真蛋白含量的应用

饲料中蛋白质含量是衡量其营养价值的核心指标，但传统粗蛋白检测常受非蛋白氮干扰，无法真实反映饲料对动物的实际营养价值。本文采用凯氏定氮法结合前处理工艺，精准测定饲料中蛋白含量，为饲料品质鉴定提供可靠方法。

一、实验原理与材料准备

测定原理
在催化剂（如硫酸铜等）作用下，样品经浓硫酸高温消化，有机氮被氧化、分解并转化为无机铵盐。随后加入强碱（如氢氧化钠）营造碱性环境，铵盐与碱反应释放出氨，氨随水蒸气蒸馏分离，被过量硼酸溶液吸收。吸收氨后的硼酸溶液，用已知浓度的盐酸或硫酸标准溶液滴定，依据酸碱反应的计量关系，通过消耗酸的量计算样品中氮的含量，完成从有机氮到可测氮量的转化与定量分析。

仪器与试剂
仪器：粉碎机；感量0.1mg分析天平；格丹纳 N810免水全自动凯氏定氮仪； DNS-20石墨消解炉；
试剂：98%浓硫酸、10%硫酸铜溶液、40%氢氧化钠溶液、2.5%氢氧化钠溶液、20g/L硼酸、0.1011mol/L硫酸标准溶液等。

二、实验步骤

样品前处理

将风干饲料粉碎后过40目筛，精确称取约0.5g试样（精确至0.0001g）置于250mL烧杯中，加入75mL蒸馏水，加热至沸并保持30分钟。

依次加入2.5%氢氧化钠溶液20mL和10%硫酸铜溶液20mL，充分搅拌后微沸，冷却放置2小时以上。

用定性滤纸过滤，用70-80℃热水冲洗沉淀5次以上，直至用5%氯化钡溶液和盐酸检查滤液无白色硫酸钡沉淀（确认洗涤干净）。

将沉淀与滤纸在65℃烘箱中烘干。同时设置对照样品：样品不做沉淀处理直接消化，其两个样品添加0.0636g尿素，添加0.1135g硫酸铵。

消化与检测

消化：将干燥后的沉淀与滤纸放入消化管，加入15mL浓硫酸、3g硫酸钾和0.2g硫酸铜，采用梯度升温程序（200℃/30min→320℃/30min→400℃/90min）在石墨消解炉上消化，同时做空白试验。

测试：将冷却后的消化管置于免水全自动凯氏定氮仪，设置参数为硼酸20mL、碱60mL、稀释水10mL，开始蒸馏，自动计算并打印结果。

三、结果与分析

空白与粗蛋白测定

样品空白消耗滴定酸体积平均值为0.5421mL，为结果校正提供基准。
未处理样品的粗蛋白含量平均值为15.5480%，反映了包含非蛋白氮的总含氮量。

真蛋白测定结果

经沉淀处理的样品中，因过滤损失结果偏低，舍去后其余样品真蛋白含量平均值为13.6072%。
对比可知，粗蛋白与真蛋白含量相差近2%，表明饲料中存在非蛋白氮成分。加尿素和加硫酸铵的真蛋白含量与其他样品接近，验证了该方法能有效排除非蛋白氮干扰。

结论

该方法通过前处理去除非蛋白氮，结合凯氏定氮法精准测定真蛋白，操作可行、结果可靠，可用于饲料真蛋白的实际检测。本方法仅供参考。

参考方法
GB/T 6432 - 2018《饲料中粗蛋白的测定凯氏定氮法》

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